T/G HA－VSMC血管平滑肌细胞

细胞介绍
T/G HA-VSMC细胞建系于1992年（Tilberg A F，et al）。该细胞系属有限细胞系，可因连续传代而衰老死亡。连续传代试验显示，T/G HA-VSMC细胞经历15-20个群体倍增时间就会衰老死亡，固需控制有限的传代次数。

细胞特性
1）来源：血管平滑肌
2）形态：成纤维细胞样，贴壁生长
3）含量：>1x10^6 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T75瓶或者1mL冻存管包装

T/G HA－VSMC血管平滑肌细胞

运输和保存

（1）使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。

（2）收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。       

       
细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准准备F12K培养基(F12K，SIGMA,货号N3520，添加NaHCO3 2.5g/L，添加以下添加物0.05 mg/ml维生素C; 0.01 mg/ml 牛胰岛素; 0.01 mg/ml 转铁蛋白; 10 ng/ml亚xi酸钠; 0.03 mg/ml内皮细胞生长添加剂(ECGS); 10 mM， HEPES； 10 mM ，TES)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。